自1986年首個單克隆抗體被批準以來，抗體工程已經走過了三十多年的歷程。在此期間，重大的技術進步使抗體治療藥物的發現和開發變得更快、更高效。抗體藥物由于特異性強，不良反應越來越少。因此，治療性抗體已成為近年來開發的最主要的一類新藥。

在臨床使用的所有抗體藥物有人源抗體、人源化抗體、嵌合抗體和小鼠抗體，其中人源抗體和人源化抗體是治療性抗體領域的主要模式。本文將概述用于開發治療性抗體藥物的抗體工程和技術平臺，包括噬菌體展示、轉基因小鼠和單B細胞抗體技術。介紹如何使用親和力成熟法優化抗體結合活性。

治療性抗體的開發方法概覽

獲得諾貝爾獎的人源化技術：噬菌體展示

噬菌體展示是應用最廣泛的體外抗體篩選技術。它利用DNA重組技術將外來多肽與噬菌體M13的外殼蛋白（pIII）融合，從而將多肽顯示在噬菌體表面。這種方法可從108倍過量的噬菌體池中親和性選擇抗原特異性噬菌體抗體。噬菌體展示技術的大致流程有：構建抗體-文庫；抗體庫迭代篩選；親和力篩選。

噬菌體展示法因其易于篩選高親和力抗體和高通量應用而被廣泛用于抗體的親和力成熟。

獲得全人源抗體的另一種技術：轉基因動物 

轉基因動物具有無需人源化、多樣性更強、體內親和力成熟和克隆分離抗體優化等優點。但由于人類Ig基因座的巨大體積，以及需要進行多種重排，并大量使用人類的V、D和J片段。為了克服這些挑戰，需要進行大量的工作，采用不同的策略來產生表達人類抗體序列的動物模型。

快速高效的篩選技術：單B細胞技術

單B細胞抗體技術的主要優點是只需要幾個細胞，就能高效、快速地分離出潛在的mAbs，有利于在傳染病等緊急情況下快速開發相關疫苗。此外，單B細胞克隆保留了生物介導的重鏈和輕鏈配對，在哺乳動物細胞系中克隆和表達這些基因，以立即生成重組抗體，因此已成為一種越來越有吸引力的方法。

目前，噬菌體展示、轉基因小鼠和單B細胞抗體技術已被證明是產生人類抗體的可靠方法。

帝肯TECAN抗體藥物篩選技術與高通量方法

1.噬菌體展示技術平臺

噬菌體展示技術能在短短幾周內分離出單克隆抗體，遠遠快于傳統的雜交瘤方法。該方法通常基于磁珠法，一次使用數十塊96孔板進行淘洗，快速篩選出特異性全人源化抗體片段。

● 方案特性

❖自動化：從panning、克隆挑選到抗體親和力驗證的整個流程自動化運行

❖多功能：靈活8通道機械臂不僅可進行稀釋、菌落涂布和克隆挑選，實現多種功能與應用

❖高效率：每小時可挑選1000個克隆，大幅度節省時間，減少人力成本

❖易整合：方便整合核酸提取儀、酶標儀、洗板機等設備模塊

2.單B細胞篩選技術

Tecan單B細胞篩選平臺支持B細胞“復制”法，離心并通過Uno單細胞分液儀分選單B細胞，快速分離抗體可變區編碼基因，構建自然配對的VH-VL庫，并導入細胞進行表達，篩選特異性抗體。

單B細胞快速分液儀—Uno

TecanUno單細胞分液儀支持廣泛的單細胞應用，包括細胞系開發、單細胞分析等。Uno能夠進行精準的單細胞分液并保證細胞活性，同時還能實現從皮升到微升級別的試劑的快速分配。

優勢特性

❖緊湊設計，直觀簡約的軟件，簡單且易于使用

❖快速分細胞到384孔板

❖可靠的分選過程實現可重復的結果

❖溫和的單細胞分選保持細胞完整性和90%細胞活力

3.雜交瘤細胞培養與篩選平臺

Tecan自動化雜交瘤篩選工作站，不僅可自動化處理細胞的多倍稀釋，細胞接種、換液等培養操作，實現細胞轉染、計數以及活性分析；還可選配整合酶標儀、洗板機，實現分泌特定單克隆抗體的雜交瘤細胞的篩選和確認。

4. 單B細胞分離或抗體親和力篩選平臺

流式細胞術可將單B細胞從PBMC或淋巴組織中分離出來，也是抗體親和力篩選或中和抗體篩選使用的方法之一。

Tecan自動化流式樣本前處理系統，整合離心機，從操作步驟的角度可以實現完全平行的人機轉移。樣本類型涵蓋血液、骨髓、組織、細胞及微球等常見流式樣本，可以進行全流程自動化的胞外、胞內和核內 4℃ 染色及洗滌，通量可達1-4塊96孔板。