在樣品純化分離的過程中，梯度洗脫或者等度洗脫的兩種分離方法之間的選擇一直都是樣品處理過程中比較常見的問題，兩種方法的選擇經常出現在反應混合體系分離純化以及天然產物樣品提取的過程中，本文以此展開討論和研究。

等度洗脫意味著在整個色譜分離過程中，用于進行純化的流動相混合物，從始至終保持著相同的極性和比例（強極性和弱極性溶劑之間），比如10%EA/PE。如果使用薄層色譜法（TLC）作為快速色譜法的基礎，等度洗脫可以更加真實的還原TLC薄層板上面所展示的極性和樣品分離情況。

而對于梯度洗脫而言，其起始流動相溶劑比例和結束時的溶劑比例則不同，通常是通過梯度法從弱溶劑百分比較高的流動相開始，以強溶劑百分比較高的流動相結束。

在實際應用過程當中，梯度洗脫還可分為兩種類型的梯度方式，即線性（梯度）和階梯式（梯度）。它們有自己的優點，我隨后將加以討論。

1.等度洗脫

如前所述，等度洗脫是使用固定的溶劑混合比例來分離和洗脫樣品的成分。等度洗脫很簡單，但確實也存在一些缺點，其最大的缺點就是是色譜峰出現變寬或拖尾。當粗品在色譜柱中進行吸附和解吸附的相互作用時，對固定相具有較大吸附力的的化合物，比對流動相親和力更大的化合物洗脫更慢。由于流動相濃度和極性沒有變化，因此其在色譜柱中所消耗的時間會明顯大于流動相極性逐漸增加的洗脫方法，時間越長，其峰寬越大，同時該樣品所消耗的溶劑也就越多，從而增加了純化該樣品所消耗的溶劑和時間，我們將此現象命名為：稀釋效應，伴隨著色譜帶加寬，如圖1所示。

圖1

2.梯度洗脫

在梯度純化過程中，通過改變流動相的洗脫強度，增加了后期洗脫化合物在流動相中的溶解度和濃度，從而加快其洗脫。通過這種做法，后面的洗脫極性永遠比前面高，增加了樣品的濃度，同時樣品色譜峰的峰寬也會進一步變窄，減少溶劑消耗，提高效率，同時梯度洗脫還可以提高樣品分離量，從而進一步增加樣品處理量以及可以得到高純度的餾分。

梯度洗脫分為兩種常用的梯度，線性（梯度）和階梯式（梯度）。在線性梯度下，溶劑比例會進行線性增加，加快了極性大樣品化合物的洗脫，并改善了分離效果，如圖2。

圖2

而階梯式梯度則是由一系列度等洗脫組合而成。（想想樓梯就可以直觀感受階梯式梯度“樣貌如何”）每個連續步驟都是不同的溶劑比，包含較高百分比的強溶劑，如圖3。階梯式梯度背后的思路是盡可能控制個別化合物的洗脫條件，以最大限度地實現化合物之間的分離。此外，階梯式梯度的一個顯而易見的優點是減少了進行純化所需的溶劑量。

圖3

從以上實際的實驗數據，我們可以發現，對于梯度洗脫而言，無論是線性還是階梯式洗脫，均比等度洗脫提高了快速色譜分離的效率和性能。