對(duì)于分離樣品而言，例如將合成混合物或生物學(xué)粗提物分離為單一組分，色譜分析技術(shù)無(wú)疑是最強(qiáng)大方法之一。色譜分離技術(shù)以兩個(gè)相之間的物質(zhì)分配為基礎(chǔ)：有較大表面的固定相和可在固定相之間移動(dòng)的流動(dòng)相。

最常用的色譜分析類型是氣相色譜法或液相色譜法。這兩種方法的差異在于柱色譜法中流動(dòng)相的物理狀態(tài)不同。在氣相色譜法中，以氣體為流動(dòng)相將樣品帶入固體固定相中，而液相色譜法以溶劑作為流動(dòng)相。化合物與固定相之間的相互作用稱為分離模式過(guò)程，這一過(guò)程受極性、分子大小或特異性結(jié)合親和力的差異所約束。液相色譜法技術(shù)的類型取決于色譜分析方法的分離模式（表1）。

色譜純化工作流程 

吸附柱色譜法是藥品、化學(xué)品、香料和其他產(chǎn)品典型分離和純化工作流程的主要部分。首先，以化學(xué)方式從植物、細(xì)菌或其他生物體合成或萃取出所需物質(zhì)。蒸發(fā)用于對(duì)材料進(jìn)行濃縮，以簡(jiǎn)化下游處理。如果樣品是不熟悉的新型材料，則需過(guò)篩以實(shí)現(xiàn)最佳色譜分離條件，通常采用薄層色譜法 (TLC) 或分析型高壓液相色譜法 (HPLC)。一旦確定合適的條件，色譜過(guò)程將升級(jí)為制備型色譜分析。在制備型步驟中，通過(guò)快速色譜法、制備型 HPLC 或二者結(jié)合對(duì)較大量的目標(biāo)化合物進(jìn)行純化。如果同時(shí)使用不同的技術(shù)，則快速色譜法用于預(yù)純化步驟，制備型HPLC用于實(shí)現(xiàn)最終高純度。成功分離出化合物后，通過(guò)蒸發(fā)或凍干技術(shù)執(zhí)行二次濃縮步驟。此時(shí)，可以利用其他技術(shù)對(duì)化合物純度和功能進(jìn)行分析，包括熔點(diǎn)分析、分析型HPLC、酶學(xué)測(cè)定或其他技術(shù)。

合成或萃取之后的完整工作流程如圖1所示。

圖 1. 一般萃取或合成工作流程中的純化工作流程

俄羅斯-意大利籍植物學(xué)家MikhailTsvet在100多年前發(fā)現(xiàn)的吸附柱色譜法是液相色譜法的最早形式，這種色譜分析工藝最開(kāi)始用于從植物中分離出顏料。從那以后，色譜分析技術(shù)快速發(fā)展，成為合成和萃取實(shí)驗(yàn)室使用的一種基本方法。

在吸附色譜法中，分離過(guò)程由樣品組分與固定相及流動(dòng)相之間的相互作用決定。具有不同化學(xué)特性（極性）的化合物對(duì)流動(dòng)相和固定相表現(xiàn)出不同的親和力或吸附強(qiáng)度。親和力受到兩種分子特征的影響：吸附和解吸附。吸附是指特定組分粘附到固定相上的能力。解吸附或溶解度是指混合物特定組分在流動(dòng)相中的溶解程度。個(gè)體樣品組分在固定相中的遷移速度取決于它們的吸附/解吸附特征，如圖2所示。

圖 2. 吸附與解吸附 

快速色譜法vs制備型HPLC技術(shù) 

第一篇關(guān)于使用高壓的出版物發(fā)表于上世紀(jì)70年代末，其中所提及的方法稱為快速色譜法。除此之外，人們還嘗試增大分析型HPLC系統(tǒng)的尺寸，使這些系統(tǒng)也能用作制備型色譜分析設(shè)備（制備型HPLC）。如今，這兩種技術(shù)廣泛用于不同目的：快速色譜法主要用于預(yù)純化步驟，以適當(dāng)分離度純化較大量的樣品；制備型HPLC的目標(biāo)是在較低進(jìn)樣量條件下實(shí)現(xiàn)最高分離度（純度）。

因此，這兩種色譜分析技術(shù)的差別在于用作固定相的材料（不同粒徑）、濾芯或色譜柱的尺寸（內(nèi)徑(ID) 和長(zhǎng)度）以及流動(dòng)相的流速，如表2所示。